optyk tczew podgórna

Niefrakcjonowane białka ekstrahowane pepsyną z M18 i M18. (odpowiednio znakowane pep M18 i pep M18y) w stężeniu mg / ml hamowało opsonizację o 70. 80%. Wchłanianie surowicy odpornościowej za pomocą frakcji żelu nr 10, która zawierała białko w przybliżeniu 24 kDa, dało podobny poziom zahamowania opsonizacji. Spa oczyszczono z surowego ekstraktu pepsyny M18. przez strącanie siarczanem amonu i preparatywną elektroforezę w żelu. Oczyszczone spa migrowało jako pojedyncze pasmo, co oceniono za pomocą SDS-PAGE, o masie cząsteczkowej 24 kDa (Figura 3b). Degradacja oczyszczonego białka Edmana ujawniła sekwencję pierwszych 23 aminokwasów jako DSVSGLEVADPSDSKKLIELGLA. Ponadto, wewnętrzny peptyd oczyszczony z trawienia LysC nienaruszonego Spa otrzymywał sekwencję końca NH2 YRLDSESHLK. Figura 3 STRONA oczyszczonego fragmentu Spa (ścieżki aib) i analiza Western błot natywnego białka ekstrahowanego przez lizynę faga (ścieżki cid). Nieoczyszczony pep M18. (ścieżka a) i oczyszczone Spa (ścieżka b) poddawano elektroforezie w 10% żelu poliakrylamidowym w warunkach redukujących i barwiono błękitem Coomassie. Oczyszczone Spa migrowało z masą cząsteczkową 24 kDa. Przeprowadzono analizę Western blot w celu zidentyfikowania macierzystego Spa, które zostało uwolnione ze ściany komórkowej M18. przez kojarzącą się z grupą fagową lizynę z wiązaniem fagowym grupy C (19). Surowy ekstrakt lizyny zawierał wiele białek zabarwionych błękitem Coomassie (linia c). Surowica przeciwko syntetycznemu peptydowi Spa poddała się reakcji z pojedynczym białkiem w ekstrakcie o masie cząsteczkowej 50 kDa (linia d). Aktywność bakteriobójcza przeciwciał Spa. Aby bezpośrednio ocenić obecność epitopów bakteriobójczych w Spa, króliki immunizowano 100 .g oczyszczonego białka w CFA w 0, 4 i 8 tygodniu. Surowica uzyskana 10 tygodni po pierwszej iniekcji zawierała przeciwciała, które opsonizowały macierzysty M18 i M18. (Tabela 3). Żadna z surowic odpornościowych Spa nie reagowała krzyżowo z oczyszczonym rekombinowanym M18 lub oczyszczonym rekombinowanym Enn18, jak określono za pomocą testu ELISA (dane nie pokazane). Wyniki testów opsonizacji zostały potwierdzone przez pośrednie testy bakteriobójcze (Tabela 4). The Spa antiserum była bakteriobójcza zarówno dla M18 i M18 .. Antiserum przeciwko rM18 było bakteriobójcze tylko wobec macierzystego szczepu M18, a nie przeciwko M18. (Tabela 4). Mieszanina surwiów Spa i rM18 spowodowała całkowite zabicie szczepu rodzicielskiego M18, co sugeruje, że 2 antysurowice mają addytywny efekt bakteriobójczy (Tabela 4). Tabela 3Opsonizacja paciorkowców typu 18 przez surowice odpornościowe królika przeciwko oczyszczonemu Spa i peptyd syntetyczny z Spa Tabela 4 Aktywność bakteriobójcza króliczych surowic odpornościowych przeciwko rM18 i oczyszczonego Spa przeciwko M18 i M18. Pasywne testy ochrony myszy z anty-Spa i anty-rM18. Przeprowadzono testy pasywnej ochrony myszy w celu wykazania obecności ochronnych epitopów w Spa. W obu eksperymentach grupy po 10 myszy były uprzednio leczone anty-Spa, anty-rM18 lub równoważną mieszaniną 2 antysurowic, a następnie poddane prowokacji M18 lub M18. (Tabela 5). Spośród myszy prowokowanych macierzystym szczepem M18, tylko 3 z 20 zwierząt kontrolnych przeżyło. Te, które były wcześniej leczone anty-rM18 lub anty-Spa miały wyższe wskaźniki przeżycia, ale nie były statystycznie różne od grupy kontrolnej. Co ciekawe, myszy, które otrzymały mieszaninę anty-Spa i anty-rM18 były znacząco chronione przed infekcjami prowokacyjnymi macierzystym szczepem M18 (Tabela 5). Spośród myszy prowokowanych M18a, te, które były wcześniej leczone anty-Spa były w znacznym stopniu chronione przed śmiercią w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi otrzymującymi normalną surowicę króliczą (Tabela 5). Podsumowując, wyniki te bezpośrednio wskazują na obecność ochronnych epitopów w Spa. Tabela 5 Obojętna ochrona myszy przed infekcjami prowokacyjnymi za pomocą M18 lub M18. przez króliczą surowicę odpornościową przeciwko rM18 i Spa Identyfikacja epitopów opsonowych w NH2-końcu Spa
[hasła pokrewne: choroba legionistów, ciśnienie krwi tabela, candida albicans objawy ]