poradnia neurologiczna nowy tomyśl

Charakterystyka sekwencji i profil sygnalizacyjny FGF-21 wskazują, że jego receptor może należeć do nadrodziny FGFR. Ekspresję FGFR-1 i FGFR-2, w tym kilka wariantów składania tych receptorów, łatwo wykryto w komórkach 3T3-L1 za pomocą RT-PCR i analizy immunoblot. Podczas gdy FGFR-5 wykryto również za pomocą RT-PCR, zaobserwowano znacznie niższe poziomy FGFR-3 i brak ekspresji FGFR-4. Immunoprecypitowano FGFR-1 i FGFR-2 z adipocytów 3T3-L1 specyficznymi przeciwciałami i wykryto w obu przypadkach 2 fosforylowane białka tyrozyny o wielkości w przybliżeniu 120 150 150 kDa w komórkach stymulowanych FGF-21 (3 (Figura 2B), podczas gdy nie zaobserwowano fosforylacji w immunoprecypitatach FGFR-3 w podobnych warunkach (dane nie pokazane). Te pasma fosforylowane przez tyrozynę później ponownie repobowano przeciwciałami anty-FGFR-1 i anty-FGFR-2, odpowiednio (Figura 2B), co wskazuje, że mogą one reprezentować aktywowane formy FGFR-1 i FGFR-2. Co istotne, obserwowana fosforylacja zależna od FGF-21a była specyficzna dla adipocytów, ponieważ nie wykryto jej w preadipocytach 3T3-L1. FGF-21 nie indukuje mitogenności in vitro. Jako klasa wiadomo, że FGF indukują proliferację komórek. Dlatego zbadaliśmy mitogenny potencjał FGF-21 w komórkach typowo wrażliwych na FGF. FGF-21 nie indukował proliferacji fibroblastów 3T3-L1, NIH 3T3 lub BALB / c 3T3, komórek nabłonka małpy 4MBr5, pierwotnych ludzkich komórek nabłonka sutka (HMEC) lub ludzkich komórek śródbłonka żyły pępkowej (HUVEC), albo pod nieobecność lub obecność egzogennej heparyny. Przeciwnie, FGF-7, FGF-1 i FGF-2 stymulowały wzrost tych komórek. Co więcej, w eksperymentach związanych z koimulacją, FGF-21 nie antagonizował aktywności mitogennej indukowanej przez te cząsteczki FGF (Figura 3). Figura 3FGF-21 nie indukuje proliferacji i nie blokuje mitogenności zależnej od FGF-7a na komórkach 4MBr5. Komórki stymulowano, jak wskazano, różnymi stężeniami FGF-7, FGF-21 i FGF-21 w obecności stałego stężenia heparyny i FGF-21 w obecności stałego stężenia FGF-7. Podawanie FGF-21 dla gryzoni na cukrzycę. Aby sprawdzić, czy obserwowana aktywność bioaktywności in vitro FGF-21 uległa translacji na działanie obniżające stężenie glukozy in vivo, podawaliśmy białko myszom ob / ob, modelowi hiperglikemii i oporności na insulinę. Myszom wstrzykiwano sc raz na dobę 125 lub 750 .g / kg / dzień FGF-21 przez 7 dni. Poziomy glukozy we krwi oznaczano godzinę po podaniu w dniach 3 i 7. Obydwie dawki znacząco obniżały poziom glukozy we krwi w porównaniu z podawaniem nośnika po 3 dniach podawania. Efekt był jeszcze wyraźniejszy po 7 dniach, przy czym normalne poziomy glukozy były normalizowane w obu grupach dawek (Figura 4A). Ponadto poziomy triglicerydów w osoczu wykazywały zależną od dawki redukcję po 7 dniach iniekcji FGF-21 (Figura 4B). Podobne działania obniżające stężenie glukozy zaobserwowano również po podaniu FGF-21 myszom db / db (Figura 4C) i 8-tygodniowym otyłym szczurom Zucker z cukrzycową otyłością (ZDF) (Figura 4D). Figury 4FGF-21 badania iniekcji u gryzoni. Pokazane wartości (. SE) są średnią z pomiarów co najmniej 5 zwierząt w grupie. * P <0,05, ** P <0,02 i #P <0,001 w porównaniu z kontrolą nośnika. Poziom glukozy we krwi (A) i poziomy triglicerydów (B) u myszy ob / ob leczonych FGF-21. FGF-21 podawano raz dziennie, a poziomy glukozy i triglicerydów we krwi mierzono godzinę po ostatnim wstrzyknięciu. (C) Poziomy glukozy we krwi u myszy db / db w dniach 18 i 46 podczas 8-tygodniowego badania ciągłej infuzji. Myszom podawano infuzyjną dawkę 11 ug / kg / h FGF-21 przy użyciu minipomp ALZET [patrz też: budowa stawu kolanowego, ciśnienie skurczowe, ciśnienie krwi normy ]