przychodnia rejonowa karczew

Dynamikę oddziaływania płytek z uszkodzoną ścianą naczynia i rosnące skrzepliny płytkowe obserwowano następnie przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego lub różnicowego kontrastu interferencyjnego (DIC) przy użyciu mikroskopu Leica DMIRB (soczewka 1.2NA2 o wielkości 1.23) i rejestrowano na filmie do analizy off-line. W niektórych doświadczeniach przemyte płytki szczurzych znakowano fluorescencyjnie DiOC6 i wstępnie inkubowano przez 10 minut z samym buforem (kontrola) lub RPM1 (10 .g / ml), RPM15 (50 .g / ml) lub RPM9 (50 .g / ml). Wstępnie inkubowane płytki krwi wstrzyknięto do żyły szyjnej, a ich interakcje z wcześniej utworzonymi skrzeplinami tętniczymi i żylnymi obserwowano przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej. Przeżywalność płytek krwi in vivo po wstępnym traktowaniu przeciwciałami RPM badano jak opisano wcześniej (12, 17). Szybkości ścinania w naczyniach krezkowych określono przez dożylne wstrzyknięcie perełek fluorescencyjnych (średnica 0,25 (im, Molecular Probes) przez cewnik szyjny (18). Prędkości perełek w tętniczkach (średnica 9. 31,8. M) i żyłkach (średnica 26,9. 90,1. M) obliczono według Tangelder i in. (19). Stawki ścinania były następujące: tętniczki, średnia 1144. 176 s 1 (zakres 580. 1906, n = 3); i żyłki, średnia 343. 47 s 1 (zakres 152. 697, n = 3). Wyniki W celu zbadania mechanizmu agregacji płytek, jaki zachodzi w miejscach uszkodzenia naczyń, ustaliliśmy test agregacji in vitro oparty na płynięciu, w którym płytki krwi znakowane fluorescencyjnie w pełnej krwi perfundowano na nieoznakowanej monowarstwowej płytce z płytkami w żyle (150 s. 1). ), tętnicze (600 s. 1) lub szybkości ścinania tętniczego (1800 s. 1) (20). Jak pokazano na ryc. 1a, rozprzestrzenianie się monowarstw z płytek krwi było w stanie wspierać adhezję płytek krwi z płynącej krwi, przy czym liczba płytek krwi przylegających do powierzchni unieruchomionej monowarstwy wzrastała w funkcji ścinania. Analiza dynamiki poszczególnych płytek kontaktowych adhezji płytek wykazała, że większość płytek krwi uwiązanych do powierzchni unieruchomionych płytek krwi uległa następnie translokacji i / lub odłączeniu (Figura 1b). Przy niskim ścinaniu (150 s. 1), 45. 8% (n = 6) spętanych płytek tworzy natychmiastowe stacjonarne kontakty adhezyjne (zdefiniowane jako ruch komórki <1 średnica komórki od punktu początkowego kontaktu przez 10-sekundową ramkę czasową; Figura 1c), 36. 5% komórek uległo translokacji (zdefiniowanej jako ruch komórki> średnica komórki od punktu pierwszego kontaktu) i 31. 9% odłączone od monowarstw płytki krwi (Figura 1b). Przy zwiększającym się ścinaniu, mniej płytek dawało natychmiastowe stacjonarne kontakty adhezyjne (9. 4% przy 600 s. i 3. 1% przy 1800 s. 1; Figura 1c), przy czym większość komórek przemieszczała się (63. 4% po 600 s). <1 i 60 <2% przy 1800 s <1) i / lub odłączenie od monowarstw płytki krwi (57 . 6% przy 600 s <1 i 64 <10% przy 1800 s <1; Figura 1b). Dynamika interakcji płytek krwi z płytkami pod wpływem przepływu była podobna, gdy stosowano konfluentne monowarstwy płytek krwi przygotowane na szkle, immobilizowane vWf lub fibrynogen (dane nie pokazane), co pokazuje, że zjawisko to nie było unikalne dla płytek aktywowanych szkłem. Ponadto, translokacja i odłączanie się płytek było znaczącą cechą wzrostu zakrzepu, szczególnie przy podwyższonych szybkościach ścinania (600 i 1800 s. 1), przy perfuzji pełnej krwi na wstępnie utworzone skrzepliny płytkowe (dane nie przedstawione). Ryc. Dynamika agregacji płytek w przepływie. Wyznakowane fluorescencyjnie ludzkie płytki krwi w pełnej krwi perfundowano przez konfluentne rozłożone monowarstwy płytek w 150, 600 i 1800 s 1 przez minutę. (a) Obrazy przedstawiają zależny od ścinania wzrost adhezji płytek krwi po minucie przepływu. Liczba tetheringu płytek krwi w 10-sekundowym okresie jest przedstawiona na wykresie liniowym. Każda spętana płytka była badana w ciągu dalszych 10-sekundowego okresu czasu, a odsetek (b) płytek przemieszczających i / lub odłączających i / lub (c) tworzących stacjonarne (natychmiastowe stacjonarne lub translokujące, a następnie stacjonarne) określono [hasła pokrewne: ciśnienie krwi normy, chora tarczyca objawy, choroba dekompresyjna ]