psychiatra warszawa tanio

Jest to kwestia krytyczna, ponieważ agregacja płytek w miejscach uszkodzenia naczyń nie występuje zwykle pomiędzy płytkami w zawiesinie, ale raczej wiąże się z narastaniem płytek krwi ze swobodnie płynącej krwi na powierzchni światła rozwijającego się skrzepliny. Tak więc płytki krwi unieruchomione w miejscach uszkodzenia ściany naczynia zapewniają wysoce reaktywną powierzchnię do rekrutacji dodatkowych płytek krwi z przepływającej krwi. Pomimo zasadniczego znaczenia dla hemostazy i trombenezy, natura tej reaktywnej powierzchni pozostaje nie do końca poznana. W tym badaniu zbadaliśmy mechanizm, za pomocą którego płytki krwi w płynącej krwi przywierają do powierzchni unieruchomionych płytek krwi, stosując test agregacji oparty na płynie in vitro i model zakrzepicy in vivo. Badania te wykazały, że agregacja płytek krwi in vivo jest dynamicznym procesem, w którym płytki krwi w płynącej krwi nieustannie wiążą się, przemieszczają i / lub odrywają od powierzchni światła rozwijającego się skrzepliny, przy czym tylko niewielki procent płytek tetheringowych tworzy stacjonarne kontakty adhezyjne. W procesie tetheringu / translokacji pośredniczy wiązanie GPIb. na swobodnie płynących płytkach do vWf ulegających ekspresji na powierzchni unieruchomionych płytek krwi. Ten mechanizm tetheringu jest niezbędny do tworzenia styków adhezyjnych płytek krwi przy szybkościach ścinania tętnic, a także może zwiększać wydajność procesu agregacji płytek krwi na żylnych poziomach ścinania. Metody Przeciwciała, konstrukty i linie komórkowe. Anty-Alb-3C7E3 Fab pochodził od Eli-Lilly (Centocor, Leiden, Holandia). Anti-GPIb. przeciwciało, AN51, pochodziło z DAKO (Botany, Nowa Południowa Walia, Australia). Anty-IIb-3F (ab) 2. RPM1, anti-GPIb. Fab RPM15, czyli anty-GPV F (ab) 2. RPM9, w stosunku do glikoprotein szczurzych, wytworzono i scharakteryzowano jak podano wcześniej (8). Przeciwciało w domenie anty-vWf A1, 5D2, było hojnym darem od Michaela Berndta (Baker Medical Research Institute, Melborne, Australia). Rekombinowaną domenę A1 wytworzono i scharakteryzowano, jak podano w innym miejscu (9). Komórki jajnika chomika chińskiego (CHO) transfekowano kompleksem GPIb / IX (CHOIb / IX) lub samym wektorem (CHOpDX), jak opisano wcześniej (10). Badania przepływu in vitro. Krew pobrano od zdrowych dawców lub osobników z chorobą von Willebranda typu III (vWD; <1% osocza i płytek krwi) lub trombastenią Glanzmanna (GT; <1%> IIb <3). Przemyte płytki krwi przygotowano od ludzkich dawców (11) lub szczurów Wistar, jak podano wcześniej (12). Testy oparte na płynięciu przeprowadzono zgodnie ze zmodyfikowaną metodą Cooke i in. (13). Konfluentne monowarstwy płytek (> 90% pokrycia powierzchni) uzyskano przez umożliwienie przemycia płytek (2 x 108 / ml) do rozprzestrzeniania (30. 60 minut, 37 ° C) na szklane mikrokapilarne rurki (Vitro Dynamics Inc., Rockaway, New Jersey, USA). Mikrokapilar były powlekane kolagenem fibrynowym typu I ze ścięgna końskiego (2,5 mg / ml) przez noc w 4 ° C. Krzepkę pełną antykoagulowaną (15 mM cytrynian trisodowy, pH 7,4) inkubowano z barwnikiem fluorescencyjnym DiOC6 (1 uM, 10 minut, Molecular Probes Inc., Eugene, Oregon, USA), a następnie perfundowano na wstępnie uformowane monowarstwy szczurów lub ludzkich płytek krwi. przy 150, 600 lub 1800 s . przez minutę. Większość badań przeprowadzono z krwią z cytrynianem, chociaż podobne wyniki uzyskano dla krwi D-fenyloalanylo-L-prolilo-L-argininowej z chlorometyloketonami (PPAK-antykoagulowany) (40 .M). Interakcja płynących płytek z wcześniej utworzonymi monowarstwami płytek krwi była oglądana w czasie rzeczywistym przy użyciu mikroskopii fluorescencyjnej i rejestrowana na wideo dla analizy w trybie off-line. W niektórych doświadczeniach krew ludzką inkubowano przez 10 minut z c7E3 (20 .g / ml), AN51 (0,6 .g / ml) lub rekombinowaną domeną A1 vWf (60 .g / ml), podczas gdy krew szczura wstępnie inkubowano przez 10 minut z mAb RPM1 (10 .g / ml), RPM15 (50 .g / ml) lub RPM9 (50 .g / ml). Analiza płytek krwi w czasie rzeczywistym – kontakty adhezyjne płytek krwi
[więcej w: parafia płońsk, ciśnienie krwi tabela, choroba somatyczna ]