sok ze świeżych buraków czerwonych

Sugeruje to, że mutant nie ekspresjonował innego białka M lub białka podobnego do M, zawierającego te współdzielone powtarzające się epitopy. Te dane, wzięte razem z wynikami analiz Southern blot i PCR, wskazują, że. element wprowadzono do genu emm18 i że białko M18 nie ulegało ekspresji za pomocą M18 .. Figura Analiza Western blot ekstraktów z całych komórek M18 (linie a, c i e) i M18. (ścieżki b, d i f) reagowały z króliczymi surowicami odpornościowymi przeciwko rM18 (ścieżki aib), SM18 (1-30) (ścieżki cid) i SM5 (265-291) (ścieżki eif). Coomassie blue. Barwione wiele białek w ekstraktach z obu szczepów (M18, ścieżka g; i M18 ., ścieżka h). Wzrost w krwi i mysim zjadliwości M18 i M18 .. . Zjadliwość M-negatywnego mutanta paciorkowców typu 18 najpierw oceniano na podstawie jego zdolności do wzrostu w nieimmunologicznej ludzkiej krwi (tabela 1). Rodzicielski szczep M18 wzrósł do nieco ponad 8 pokoleń po 3-godzinnym obrocie we krwi. M18. mutant wzrósł do około 7,5 pokolenia w tym samym teście. Najbardziej rygorystycznym testem laboratoryjnym na wirulencję są śródotrzewnowe infekcje prowokacyjne u myszy nieimmunologicznych. LD50 dla M18 i M18. zostały obliczone po dootrzewnowych wstrzyknięciach 10-krotnie zwiększających się dawek każdego organizmu. LD50 macierzystego szczepu M18 wynosiło 0,73 x 105, a LD50 M18. wynosiła 1,26 x 105. Spośród 24 myszy prowokowanych każdym organizmem, 8 poddanych prowokacji za pomocą M18 zmarło, a 7 poddano prowokacji za pomocą M18. zmarły. Organizmy odzyskane ze śledzion myszy, które uległy infekcji M18. były oporne na kanamycynę i M18 ujemne, co wskazuje, że nie było powrotu do macierzystego fenotypu in vivo. Wyniki te wykazały, że ekspresja M18 nie była konieczna do zjadliwości paciorkowców typu 18. Tabela Wzrost M18 i M18. paciorkowce w ludzkiej krwi Opsonizacja M18 i M18 .. Przerwanie ekspresji emm18 mogło spowodować wirulentny mutant, który nie eksprymował ochronnego antygenu, lub alternatywnie, który eksprymował drugi ochronny antygen na swojej powierzchni. Przeprowadzono eksperymenty opsonizacji in vitro w celu określenia, czy M18. wyrażał powierzchniowy antygen, który zawierał epitopy opsonowe (tabela 2). Tylko macierzysty szczep M18 został opsonizowany przez surowice odpornościowe przeciwko SM18 (1-30) lub rekombinowanemu M18. Związek M18. z neutrofilami polimorfojądrowymi pozostały na poziomie linii podstawowej w obecności obu tych surowic odpornościowych. Antyserum hodowane w królikach przeciwko surowemu ekstraktowi pepsyny z M18. szczep jednak opsonizuje zarówno mutanta macierzystego, jak i M-negatywny (tabela 2). Tę surowicę stosowano w kolejnych doświadczeniach w celu zidentyfikowania i oczyszczenia przypuszczalnego nowego ochronnego antygenu paciorkowców typu 18. Tabela 2Opsonizacja M18 i M18. przez króliczą surowicę odpornościową przeciwko rekombinowanym M18, S-M18 (1-30) i nieoczyszczoną pep M18 Identyfikacja i oczyszczanie Spa. Aby zidentyfikować antygen powierzchniowy M18. zawierające epitopy opsonowe, przeprowadziliśmy eksperymenty z hamowaniem opsonizacji przy użyciu frakcji surowego ekstraktu pepsyny M18. oddzielone SDS-PAGE, a następnie przeniesione na papier nitrocelulozowy. Jedna sekcja bibuły nitrocelulozowej została poddana reakcji z pep M18. antyserum w celu zidentyfikowania immunoreaktywnych pasm, a inną sekcję pocięto na paski poziome, które wykorzystano do absorpcji przeciwciał opsonowych w peplicy M18. antyserum. The pep M18. ekstrakt zawierał białko o masie cząsteczkowej 24 kDa (Spa), które wchłaniało większość przeciwciał opsonowych w peplicy M18. antyserum (ryc. 2). Figura 2 Identyfikacja Spa w surowym ekstrakcie pepsyny M18 .. Ekstrakt oddzielono przez preparatywną PAGE, a cały żel przeniesiono na bibułę nitrocelulozową. Każda kreska, oznaczona numerem od do 12, wskazuje frakcję żelu stosowaną do absorpcji przeciwciał opsonicznych z króliczej surowicy odpornościowej skierowanej przeciw surowemu ekstraktowi pepsyny M18. (patrz Metody)
[hasła pokrewne: choroba behceta, choroba dekompresyjna, candida albicans objawy ]