suszone owoce żurawiny

Pokazane wartości (. SE) są średnią z co najmniej 3 niezależnych pomiarów. * P <0,02, ** P <0,001 w porównaniu z brakiem stymulacji lub kontrolą nośnika. Odpowiedź FGF-21 na dawkę 3T3-L1 (A) i ludzkich pierwotnych adipocytów (B) w teście wychwytu glukozy. (C) FGF-21 zwiększa aktywność insuliny. Komórki wstępnie traktowano FGF-21 lub bez, a następnie stymulowano insuliną, jak wskazano. (D) Cykloheksimid zmniejsza aktywność biologiczną FGF-21 w teście wychwytu glukozy. Adipocyty 3T3-L1 stymulowano FGF-21 przez 24 godziny w obecności lub nieobecności cykloheksimidu. P <0,001 przy wszystkich dawkach dla FGF-21 w porównaniu z FGF-21 plus stymulacja cykloheksymidem. FGF-21 wpływa na poziomy mRNA GLUT1 (E) i białka (F) i nie reguluje w górę białka GLUT4 (F) w adipocytach 3T3-L1 (immunoblot). Komórki głodzono, a następnie stymulowano FGF-21 lub nośnikiem, jak wskazano. Ilościowe analizy PCR i analizy immunoblotów zastosowano odpowiednio do pomiaru poziomów mRNA i białka. (G) mRNA GLUT1 jest regulowane w górę w tkance tłuszczowej myszy ob / ob, którym wstrzyknięto FGF-21a. Dwie grupy (po 5 zwierząt każda) 8-tygodniowych myszy wstrzyknięto sc FGF-21 lub podłożem. Do pomiaru mRNA zastosowano ilościową analizę PCR. Wpływ FGF-21 na wychwyt glukozy w adipocytach był niezależny od insuliny, addytywny w stosunku do aktywności insuliny po leczeniu (Figura 1C), a nie modulowany przez dodanie egzogennej heparyny. W przeciwieństwie do szybkiej odpowiedzi wywołanej przez insulinę, przeważający wpływ FGF-21 na wychwyt glukozy wymagał co najmniej 4 godzin leczenia komórkami i był znacznie zmniejszony w obecności cykloheksimidu (1 .g / ml), synteza białek inhibitor (23) (Figura 1D). Te obserwacje skłoniły nas do postawienia hipotezy, że sposób działania FGF-21 wymaga aktywacji transkrypcji. Aby zidentyfikować potencjalny mechanizm na poziomie molekularnym, za pomocą którego FGF-21 zwiększa wychwyt glukozy, zbadaliśmy, czy moduluje on poziomy ekspresji transporterów glukozy GLUT1 i GLUT4 w adipocytach 3T3-L1. Traktowanie FGF-21 (1 .g / ml) doprowadziło do znaczącego wzrostu mRNA i białka GLUT1, ale nie do GLUT4 (Figura 1, E i F). Uregulowanie poziomu GLUT1 zależne od FGF-21a zostało następnie wykazane in vivo po wstrzyknięciu bolusa u myszy ob / ob. Cztery godziny po podaniu podskórnym FGF-21 (500 .g / zwierzę), wzrost mRNA GLUT1 wykryto specyficznie w białej tkance tłuszczowej, ale nie w mięśniach, wątrobie, nerkach i mózgu (Figura 1G). Dodatkowe badania ujawniły, że wczesna indukowana przez FGF-21a sygnalizacja w adipocytach 3T3-L1 obejmowała heparynowo-niezależną fosforylację tyrozyny substratu FGFR2 (FRS-2), dokujące białko łączące FGFR z szlakiem Ras / MAPK (24) i przemijające. aktywacja MAPK (Figura 2A). Wszystkie te aktywności in vitro są typowo inicjowane po aktywacji szlaków za pośrednictwem FGFR (25). Figura 2FGF-21 stymuluje fosforylację w adipocytach 3T3-L1. (A) FGF-21 indukuje fosforylację MAPK i FRS-2 w adipocytach 3T3-L1. Po stymulacji komórki poddano lizie i zastosowano przeciwciała fosfo-specyficzne w celu określenia fosforylacji MAPK i FRS-2 w immunoblotach. Po usunięciu immunoblotów zastosowano przeciwciała anty-MAPK i anty-FRS-2 w celu potwierdzenia, że ładunki białek były równe. W celu przeprowadzenia eksperymentu MAPK komórki stymulowano FGF-21 we wskazanych czasach. W doświadczeniu FRS-2 komórki stymulowano FGF-21 lub FGF-1 (kontrola pozytywna). (B) FGF-21 stymuluje fosforylację tyrozyny FGFR-1 i FGFR-2 w adipocytach 3T3-L1. Komórki stymulowano FGF-21 i poddawano lizie. Immunoprecypitaty FGFR-1 i FGFR-2 analizowano w immunoblotach z przeciwciałami przeciw fosfotyrozynie. Po odpędzeniu zastosowano przeciwciała anty-FGFR-1 i anty-FGFR-2 w celu potwierdzenia, że ładunki białek są równe [podobne: ciśnienie tętnicze normy, olx akwarystyka, candida albicans objawy ]